Kloning Kerangka Baca Terbuka Gen Pengkode Integrase (int) HIV (Human Immunodeficiency Virus) 1 Pada Escherichia CoLi JM109

Oktavian, Antonius and Hutapea, Hotma Martogi Lorensi (2012) Kloning Kerangka Baca Terbuka Gen Pengkode Integrase (int) HIV (Human Immunodeficiency Virus) 1 Pada Escherichia CoLi JM109. Project Report. Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Vektor dan Reservoir Penyakit Salatiga.

Preview	PDF 246 LIT - KLONING KERANGKA BACA TERBUKA GEN PENGKODE INTEGR_ocr cs.pdf Available under License Creative Commons Attribution Share Alike. Download (3MB) | Preview
Preview	PDF 246 LIT - KLONING KERANGKA BACA TERBUKA GEN PENGKODE INTEGR_ocr cs.pdf Available under License Creative Commons Attribution Share Alike. Download (3MB) | Preview

Abstract

HIV adalah partikel virus yang berkaitan erat dengan penyebab AIDS. Virus ini termasuk dalam golongan retrovirus dengan materi genetiknya adalah satu pasang RNA. Multiplikasi virus ini difasilitasi oleh protein yang disebut integrase. Integrase adalah enzim yang memiliki peranan dalam menyisipkan genom cDNA HIV-1 ke dalam kromosom manusia. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh kerangka baca terbuka gen pengkode integrase HIV-1 yang selanjutnya dikloning ke dalam Escherichia coli JM109 untuk memperoleh plasmid rekombinan yang membawa fragmen DNA target tersebut. Sintesis cDNA dilakukan dengan teknik transkripsi balik dengan RNA genom sebagai templat. Selanjutnya amplifikasi dilakukan dengan teknik Polymerase Chain Reaction (PCR). Produk PCR disisipkan ke plasmid dengan sistem kloning TA. Karakterisasi terhadap produk PCR dengan elektroforesis DNA menunjukkan pita DNA yang sejajar dengan marker DNA 900 pb. Produk PCR tersebut dikarakterisasi lebih lanjut dengan teknik sekuensing. Elektroforegram menunjukkan, dari 8 sampel yang dikarakterisasi, 1 homolog dengan integrase HIV-1 asal Thailand, 2 homolog dengan segmen 4 hemaglutinin virus flu burung H5N1 asal Jawa, dan sisanya tidak terbaca oleh sekuenser. Fragmen DNA yang terkonfirmasi sebagai integrase HIV-1 digunakan sebagai DNA sisipan. Terdapat 3 klon yang diperoleh dari kloning, 1 klon berwarna putih, 1 klon berwarna biru muda, dan 1 klon berwarna biru. Ketiga klon tersebut dikarakterisasi dengan teknik PCR koloni dan elektroforesis DNA menunjukkan ada pita DNA dengan ukuran yang sesuai. Plasmid tersebut diisolasi dengan teknik Iisis alkali dan kit komersial untuk dikarakterisasi dengan teknik sekuensing. Urutan nukleotida tidak terbaca oleh sekuenser dan sedang dikarakterisasi ulang.

Actions (login required)

View Item